John Hopkins, Luton'da doğmuş ve 1993-1996 yılları arasında Leeds Üniversitesi'nde İngilizce eğitimi almıştır. Üniversite yıllarında drama grubuna katılan John, birçok oyunda yer almış ve "A Short Play About Sex and Death" adlı performansıyla "Sunday Times" öğrenci-aktör ödülünü kazanmıştır. 2000 yılında Londra Kraliyet Drama Sanatları Akademisi'nden mezun olduktan sonra, prestijli Kraliyet Shakespeare Şirketi'ne katılmış ve 2001-2002 sezonunda ilk repertuar sezonunu gerçekleştirmiştir. John Hopkins, televizyon dünyasında da adını duyurmuş ve "Midsomer Murders" dizisinde en çok tanınan rolü olan Çavuş Scott karakterini canlandırmıştır. 2004-2005 sezonunun ardından diziden ayrılan Hopkins, 2006-2007 sezonunda Kraliyet Shakespeare Şirketi'nde Julius Caesar rolünde sahne almıştır. Son dönem sahne performansları arasında "The 39 Steps" adlı komedi oyundaki Richard Hannay, "Holy Warriors" adlı yeni oyundaki Richard I ve "Much Ado About Nothing" adlı eserdeki Benedick karakterleri yer almaktadır. Ayrıca, "Stan Lee's Lucky Man" dizisinde kötü adam rolünü üstlenmiş ve BBC'nin "Poldark" drama serisinde Sir Francis Basset karakterini canlandırmıştır. John Hopkins, 2020 yılında The Times (Londra) tarafından "şu anda sahnede olan en iyi 10 Britanyalı aktörden biri" olarak gösterilmiştir.